Frage:
Untersuchung der Wirkung von Alkohol auf Zellen
user3661093
2014-12-13 04:46:20 UTC
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Ich wundere mich über die Logistik eines einfachen Experiments mit beispielsweise 3 Arten von Alkoholen und jeweils verschiedenen Konzentrationen mit einer oder mehreren Kontrollen.

Ich möchte die Auswirkungen von Alkohol auf die Mitose untersuchen . Benötige ich teure Ausrüstung oder ist sie mit Standardausrüstung machbar? Ich betrachte speziell das, was ich als negativen Einfluss auf das Zellwachstum erwarte. Möglicher Zelltod und Verlangsamung der Mitose.

"Wir erwarten, dass sich die Mitose verlangsamt und ganz aufhört oder korrumpiert, wenn die Menge des konsumierten Alkohols zunimmt. Von den drei Alkoholen, die wir testen werden, erwarten wir, dass einige mehr sind schädlich als andere. Die 3 ausgewählten Alkohole, die in der Reihenfolge ihrer vermuteten Toxizität aufgeführt sind, sind Methanol, Ethanol und 2-Methyl-2-butanol. "

Ich versuche im Grunde zu sehen, ob tertiäre Alkohole aufgrund von sicherer sind Ethanol Hauptmetaboliten Acetaldehyd & Essigsäure ist schädlicher / toxischer? Da beispielsweise tertiäre Alkohole nicht zu Aldehyden metabolisiert werden. Das macht sie theoretisch weniger toxisch als Ethanol.

Jetzt bin ich mir nicht sicher, auf welche Zellen ich testen soll, und ich bin mir auch nicht sicher, ob meine Hypothese legitim ist. Budget, Zeit und mangelndes Wissen sind gegen mich. Ich recherchiere so schnell wie möglich. Zum Glück habe ich bald Hilfe zur Verfügung, sonst wäre ich völlig überfordert. Ich bin nicht mehr auf dem Gebiet, um einen Vorsprung zu erlangen und einem Freund zu helfen, so gut ich kann. Ich werde sein Assistent sein und finde das mehr als angemessen.

Mir ist klar, dass ich nicht auf zu viele Dinge testen kann. Ich brauche ein klares Ziel. Haben Sie Vorschläge, wenn wir bestimmte Zellen gegenüber anderen testen möchten? und warum?

Die Leber verarbeitet Ethanol zu Acetaldehyd & Essigsäure. Ich würde diese Chemikalien also möglicherweise benötigen, um die Ethanoleffekte auf Zellen richtig zu testen?

Ich bin so überfordert, dass ich jetzt auf einen Stoß in die richtige Richtung hoffe. P. >

Die 3 ausgewählten Alkohole, die in der Reihenfolge ihrer hypothetischen Toxizität aufgeführt sind, sind Methanol, Ethanol und 2-Methyl-2-butanol. - Konzentrationen von jedem, die noch zu berücksichtigen sind.

Ich leide an Legasthenie und mein Wortlaut ist im besten Fall schlecht. Aber bitte beachten Sie, dass dies ein allererster Entwurf / Ideen auf dem Tisch ist. Jede Hilfe wird geschätzt, entschuldige mich für meine mangelnden Kenntnisse auf dem Gebiet. Ich versuche, mein Studium von vor 10 Jahren in 2 Tagen aufzufrischen.

Drei antworten:
TanMath
2014-12-13 05:48:35 UTC
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Großartige Idee! Es scheint, dass diese Forschung schon einmal durchgeführt wurde und Ihre Hypothese korrekt ist, aber das Testen einer Vielzahl von Alkoholen und das Testen Ihrer Hypothese für jeden von ihnen wäre ein großartiges Projekt.

Nun, um dies zu tun, Ich würde erwarten, dass Sie das Wachstum der Zellen nach bestimmten Zeiträumen überprüfen müssen. Wie würdest du das machen? Nun, das beste Gerät wäre ein Hämozytometer. Es sieht so aus, als ob der Preis zwischen 10,00 und 400,00 variiert, was ziemlich günstig ist. Natürlich würde es zu einer Mitose kommen, wenn während bestimmter Zeiträume Wachstum auftritt, was bedeutet, dass nach bestimmten Zeiträumen mehr Zellen vorhanden sind.

Welche Zellen müssen ausgewählt werden? Ich würde etwas wählen, mit dem ich leicht arbeiten kann, wie E. coli . Es ist sicher und einfach zu handhaben. Es benötigt nur minimale Ressourcen. Hier ist ein Link zu einer einfachen Kultur, die Sie wahrscheinlich zu Hause herstellen können:

http://makezine.com/projects/how-to-make-bacterial-brothagar/

Später, wenn Sie gute Daten erhalten, können Sie Säugetier- und menschliche Zellen verwenden, um zu zeigen, dass die Forschung für den Menschen relevant ist. Säugetierzellen sind jedoch schwieriger zu züchten, da Säugetierzellen langsamer wachsen als Bakterien und Pilze und außerdem eine Kontamination Probleme verursachen kann. Sie benötigen außerdem Biosicherheitsschränke oder Laminar-Flow-Hauben und lernen die aseptische und sterile Technik kennen.

user137
2014-12-13 06:08:58 UTC
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Basierend auf der Antwort von T Abraham würde ein Hämozytometer funktionieren. Für ein Hämozytometer ist jedoch ein Mikroskop erforderlich. Wenn Sie sich jedoch in einem Zelllabor befinden, haben Sie wahrscheinlich Zugriff auf ein Mikroskop. Ich würde empfehlen, Säugetierzellen anstelle von Bakterien zu verwenden. Sie sind größer und leichter zu erkennen und für die menschliche Gesundheit relevanter. Wenn Sie insbesondere an Lebertoxizität interessiert sind, versuchen Sie, HepG2-Zellen zu erhalten. Dies sind menschliche Leberkrebszellen, aber es kann zusätzlicher Papierkram erforderlich sein, da sie möglicherweise Hepatitis-Viren übertragen können.

Verwenden Sie auch eine Trypanblau-Färbung mit Ihrem Hemacytometer, um lebende und tote Zellen zu markieren. Tote Zellen können den Farbstoff nicht exportieren und werden dunkel.

Alternativ ist ein MTT-Assay eine gute Möglichkeit, die Lebensfähigkeit von Zellen zu messen, wenn Sie Zugriff auf 96-Well-Platten und Plattenleser haben . Die Verwendung eines Küvetten-basierten Spektrophotometers ist mit diesem Assay möglich, wenn Sie Ihre Zellen in größeren Behältern wie 10-cm-Schalen züchten können.

Mit dem Hemacytometer-Assay können Sie die Gesamtzahl der Zellen und den Prozentsatz der lebenden Zellen ermitteln. Der MTT-Test gibt die Anzahl der lebenden Zellen an. Um Prozent der lebenden Zellen zu erhalten, benötigen Sie eine Kontrolle, die zu 100% lebensfähig ist.

Keine dieser beiden Aussagen kann Ihnen viel über Mitose aussagen, nur die Anzahl der Zellen und die prozentuale Lebensfähigkeit.

Ich wusste nichts über tote Zellen ... aber würde es etwas ausmachen? Sicher, wenn Sie ein quantitatives und wirklich genaues Maß dafür wünschen, ob die Zellen eine Mitose erleiden, dann ist es vielleicht wichtig ... Aber wenn Sie nur darüber nachdenken, ob eine Mitose auftritt, können wir meiner Meinung nach immer noch eine vernünftige Schätzung erhalten, ohne sich Sorgen machen zu müssen tote Zellen ...
Die Trypanblau-Färbung bietet Ihnen nur einige weitere Optionen zum Sammeln von Daten. Sie können immer noch die Gesamtzahl der Zellen zählen, aber mit dem Fleck können Sie zwischen lebend und tot unterscheiden. Ich finde, es erleichtert auch das Sehen der lebenden Zellen, wenn Sie einen etwas dunkleren Hintergrund haben.
WYSIWYG
2014-12-14 13:16:07 UTC
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Zur Untersuchung der Wirkung von Alkohol auf das Zellwachstum:

Prokaryontische Zellen

  • Nehmen Sie ~ 5 ml Medium (LB für E. coli ) in Reagenzgläsern / Kunststoffröhrchen und fügen Sie eine geeignete Konzentration an Alkohol (en) hinzu.
  • Inokulieren Sie 1% Bakterien aus einer Starterkultur (OD ~ 0,6)
  • Nehmen Sie nach unterschiedlichen Zeitintervallen oder einem festgelegten Zeitpunkt etwas Kultur, verdünnen und verteilen Sie die Platte (für jedes Röhrchen).
  • Kolonien (KBE) zählen

Eukaryontische Zellen

  • Sie können dies in einer 6-Well-Platte versuchen.
  • Die Zellen so aussäen, dass sie innerhalb von 24 Stunden eine Konfluenz von 60% erreichen
  • Nach 24 Stunden: Wechseln Sie das Medium und geben Sie das Medium mit der entsprechenden Alkoholkonzentration hinzu.
  • Warten Sie mindestens eine Teilungszeit (variiert je nach Zelltyp). 24 Stunden wären ein feines Intervall für die Behandlung.
  • Wie in der anderen Antwort erwähnt, können Sie MTT-Assay oder Trypanblau verwenden, um lebensfähige Zellen nachzuweisen (es wäre schwierig, nicht lebensfähige Zellen von den lebensfähigen zu unterscheiden indem Sie nur in das Hämozytometer schauen, ohne zu färben)
  • Sie können indirekte Assays verwenden, die im Prinzip der bakteriellen Ausbreitungsplattierung ähneln. Teilen Sie die Zellen (wenn die Zellen anhaften) und impfen Sie einen kleinen Prozentsatz davon in einen anderen Kolben / eine andere Platte. Zählen Sie die Anzahl der Zellen im neuen Kolben nach 24 Stunden.
  • Sie können auch Durchflusszytometrie von mit Propidiumiodid gefärbten Zellen durchführen, um Zellen in verschiedenen Stadien der Mitose zu identifizieren.
  • Für Hefe Sie Sie können sie einfach so züchten, wie Sie Bakterien züchten würden, und die Lebensfähigkeit der Zellen entweder durch koloniebasierte Methoden oder durch Durchflusszytometrie beurteilen.


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